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免疫荧光常见问题分析
发布日期：2021-01-12 15:29 浏览量：| 问题 | 原因 | 建议 |
| 背景过高 | 一抗质量不高 | 使用特异性高、效价高的一抗 |
| 一抗/二抗浓度太高 | 降低一抗/二抗浓度 | |
| 封闭不完全 | 增加蛋白封闭时间 | |
| 洗涤不充分 | 增加冲洗次数与时间 | |
| 可通过调节荧光显微镜的参数来减低背景 | ||
| 信号弱或无信号 | 无目的蛋白或表达量极少 | 选用表达量高的细胞或组织 |
| 细胞通透性差 | 增加通透剂的作用时间或浓度 | |
| 一抗/二抗浓度太低 | 增大其浓度 | |
| 二抗选择错误（种属不匹配） | 选用与一抗种属相匹配的二抗 | |
| 荧光猝灭快 | 荧光素本身特性决定，光稳定性差 | 选用光稳定性好的荧光素二抗 |
| 用普通的封片剂封片 | 选用防荧光猝灭剂封片 | |
| 细胞有自发荧光 | 使用了戊二醛固定 | 在固定后荧光染色前进行荧光淬灭，如使用NaIO4，NaBH4，甘氨酸等，染色前检查自发荧光 |
| 材料本身（如石蜡）有自发荧光 | 设立阴性对照，通过降低荧光显微镜的参数来消除背景染色 | |
| 细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量高；培养细胞中死细胞／活细胞比例高 |
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