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新增功能:使用HisDirect直接在膜上直接检测6His标

发布日期:2021-01-14 09:46   浏览量:

省时,灵敏的检测,无需其他检测试剂(ECL)

抗His-Tag抗体克隆13/45 / 31-2(单克隆小鼠同种IgG1)被开发用于检测细胞和复杂细胞裂解物中的His表位标签(六组氨酸,His6)并检测N- / C-终端和内部His标签具有异常高的亲和力。

随着新的60nm HisDirect金标,以反他-标记 的抗体,可以在膜上直接检测的6His标记的蛋白。该方法适用于Western Blot硝酸纤维素膜和PVDF膜,也可用于细菌的菌落和平板检测。

它将抗体的结合,洗涤和检测步骤减少到通常在10至60分钟内完成的单个步骤。无需二抗,也无需使用其他昂贵的检测试剂,例如ECL。



使用两种HighFive®昆虫细胞培养表达方法的裂解物比较常规检测方法和His-Direct。箭头标记目标蛋白质。左:考马斯染色(3 h);中:带有ECL试剂的HRP-抗Penta-His抗体(4小时);右:他的直接pMolRange(20分钟)

用HisDirect量化DotBlots:

点印迹法用于定量测定His6标记的11 kDa蛋白中的蛋白质量。框标记线性检测区域。左:将0.5 µL蛋白质稀释系列在10 mL HisDirect pmolRange即用型试剂中的硝酸纤维素条上孵育90分钟,然后干燥并拍照,并将照片转换为灰度;中:蛋白质的应用量;右:使用蛋白质稀释系列进行定量的信号强度和蛋白质量之间的相关关系上图:在定量程序中根据灰度图像确定的信号强度与所施加蛋白质量的关系。内部:线性范围介于6.35 pmol和50 pmol或69 ng和0.55 µg的蛋白质之间。
 

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