具体增强信号:半抗原-抗半抗原技术（FISH和IHC）

在同一组织中间接多次标记不同生物分子的重要先决条件是选择性的一级检测试剂，该试剂可以同时通过二级免疫偶联物显示而不会发生交叉反应。通过一级检测试剂的结构差异使之成为可能：可以使用物种或同种型特异性二级抗体偶联物以区分的方式检测源自不同宿主物种或属于其他同种型的一级抗体。

但是，有时无法获得可区分的一抗，或者缺少结构差异（例如核酸序列），则不允许二抗进行区分识别。在这些情况下，可以使用所谓的半抗原-反半抗原技术。

半抗原是具有确定的化学结构的非常小的分子，由于其大小，如果不与载体蛋白偶联，则它们不是免疫原性的。但是，它们可以被抗半抗原抗体识别为抗原决定簇。众所周知的半抗原是例如生物素或洋地黄毒苷，但也有荧光色素荧光素。通过它们的化学活化衍生物（例如异硫氰酸荧光素[FITC]或活性酯），半抗原可以与核苷酸，抗体，酶或其他生物分子共价偶联。后者甚至在与半抗原缀合后仍保持其特异性，因此可以以修饰的方式用具有清晰分离信号的半抗原特异性抗体来表示。

这不仅专门检测主要检测试剂，而且经常放大其信号。半抗原-抗半抗原检测方法的另一个重要优点是，它们允许对相关抗原进行几乎没有背景的染色，因为除了生物素以外，半抗原样结构在动物细胞和组织中不会发生。

半抗原-抗半抗原技术的抗体

抗半抗原的抗体的主要用途：

• 荧光原位杂交（FISH）用于几种探针的不同标记
• 基于同时使用的荧光素和洋地黄毒苷标记的寡核苷酸的原位杂交实验。
• 庚基化一抗的检测和信号放大。
• 半抗原缀合的一抗的多个标记也来自相同的宿主物种。

具有 抗荧光素，抗地高辛和抗生物素结合物 来自Jackson ImmunoResearch Inc.的针对不同半抗原的敏感抗体可用于多种方法。抗半抗原偶联物尤其用作DNA杂交技术，免疫组化，流式细胞仪，ELISA应用中的检测试剂或在印迹膜上检测庚基化样品。高特异性使其成为理想的试剂，适用于因背景（例如内源性生物素）而导致信号检测困难的应用，多个标记中，必须保证相关生物分子的清晰区分以及信号基于不同方案的过程中应该加强。多种荧光选择

抗半抗原偶联物，用于标记细胞和组织染色中的庚基化的一抗

FISH探针和一抗的组织化学检测通过 称为CARD（催化报告基因沉积） 或 TSA（金字塔信号扩增）技术的扩增，灵敏度显着提高 。在此过程中，针对半抗原的过氧化物酶标记的抗体催化了许多待检测抗原上的氟代酪氨酸酰胺衍生物的积累，并产生了强烈的荧光信号。

荧光原位杂交（FISH）中的抗半抗原偶联物

已证明将抗半抗原偶联物用于荧光原位 杂交（FISH）中的信号放大 特别有效， 尤其是在带有与半抗原（例如生物素，洋地黄毒苷或荧光素）偶联的不同核酸探针的多色标记的情况下。在简单的扩增中，可以用抗半抗原抗体的缀合物标记庚烯基化的寡核苷酸探针（图左）。

但是，通常需要双重放大：为了增加信号，可以使用未偶联的抗半抗原抗体并使用荧光标记的二抗检测（图右）。通过使用针对第二种抗体宿主物种的荧光染色偶联物，可以进一步提高检测灵敏度。